1.培養溫度的要求總大腸菌群中的細菌除生活在腸道中外
，在自然環(huán)境中的水與土壤中也經(jīng)常存在，但此等在自然環(huán)境中生活的大腸菌群培養的合適溫度為25℃左右，
如在37℃培養則仍可生長(cháng)，但如將培養溫度再升高至44.5℃，則不再生長(cháng)，而直接來(lái)自糞便的大腸菌群細菌，習慣于37℃左右生長(cháng)，如將培養溫度升高至44.5℃仍可繼續生長(cháng)。
因此，可用提高培養溫度的方法將自然環(huán)境中的大腸菌群與糞便中的大腸菌群區分，兩種方法也都基于此理。
將接種好的樣品或裝有濾膜的培養基放入生化培養箱時(shí)，箱內溫度一定要達到所要求的溫度(44.5±0.5℃)時(shí)，方可放入。如用恒溫水浴箱時(shí)，其水面要高于接種物面，放濾膜的培養皿要沉到水浴箱底部。
2.加氯水樣的處理經(jīng)氯處理消毒過(guò)的水樣
，水中含有一定量的余氯，使大腸菌群處于受損或受抑制狀態(tài)，在采集水樣時(shí)應提前在采樣瓶中加硫代硫酸鈉，硫代硫酸鈉可以脫氯，
使受損的細菌得以復蘇與修復，從而避免出現計數結果偏低甚至假陰性的現象。此外余氯對濾膜法培養的細菌其抑制作用尤為明顯，所以抽濾時(shí)應對水樣進(jìn)行大量無(wú)菌水稀釋?zhuān)詼p少余氯的殘留。
3.樣品的保存采樣用的容器使用前應蓋好瓶蓋
，用牛皮紙將瓶蓋和瓶頸處包裹好，置干燥箱160℃-170℃干熱滅菌2h，或用高壓蒸汽滅菌器121℃滅菌15min。
采樣后水樣的正確保存也很重要，如保存不當可使樣品中的大腸菌群細菌死亡或在一定條件下再生長(cháng)，這些都將影響檢測結果的準確性。
檢測室接到水樣后，應立即檢測，如因故不能檢測時(shí)，應立即將樣品置于冰箱內(2℃-10℃)并于2小時(shí)內檢測。